在種類繁多的顯微技術(shù)中，熒光壽命顯微成像技術(shù)（FLIM）具有對(duì)生物大分子結(jié)構(gòu)、動(dòng)力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測(cè)量的能力，因此其重要性日漸提升，被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光的特性包含有：熒光激發(fā)和發(fā)射光譜、熒光強(qiáng)度、量子效率、熒光壽命等,其中，熒光壽命是指熒光分子在激發(fā)態(tài)上存在的平均時(shí)間（納秒量級(jí)）。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間，因此，測(cè)量熒光壽命需要極快響應(yīng)時(shí)間的探測(cè)器。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題，對(duì)生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)有著重要的意義。熒光壽命成像可以體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息。江蘇顯微熒光壽命成像哪里買

熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度（光子數(shù)）和光子壽命的空間分布，具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。通過雙光子激發(fā)（結(jié)合飛秒脈沖和共焦顯微鏡）可以直接檢測(cè)熒光和時(shí)間分辨的熒光壽命。這種無損檢測(cè)技術(shù)，無需解剖或?qū)ｉT制造分層樣品，不但可在樣品表面，還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測(cè)量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計(jì)優(yōu)化。熒光壽命成像圖像中每一個(gè)像素點(diǎn)在phasor圖上都有一個(gè)對(duì)應(yīng)的點(diǎn)。因此我們可以獲取每個(gè)像素點(diǎn)的壽命信息，也可以獲知每一壽命所對(duì)應(yīng)的圖像區(qū)域。廣州植物熒光壽命成像怎么操作熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度（光子數(shù)）和光子壽命的空間分布。

熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn)：在數(shù)據(jù)處理上，由于曲線擬合迭代過程的需求，計(jì)算成本較其他成像方案更高。在成像原理上，熒光壽命受多種外界因素影響，這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等，很難對(duì)這些參數(shù)控制變量，使得測(cè)量熒光壽命存在交叉干擾問題。此外，與普通光學(xué)顯微技術(shù)類似，介質(zhì)光散射影響成像信噪比及空間分辨率，成像深度受到限制。FLIM已經(jīng)在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數(shù)據(jù)處理算法等方面得到了較快的發(fā)展，這也使得熒光壽命成像FLIM在對(duì)細(xì)胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測(cè)發(fā)揮出不可替代的作用。結(jié)合多種先進(jìn)成像系統(tǒng)，如雙光子成像、結(jié)構(gòu)光照明等，可進(jìn)一步提升熒光壽命成像FLIM的分辨率和測(cè)量精度。另一方面，提升熒光壽命解調(diào)的算法性能，將壓縮感知、深度學(xué)習(xí)等熱點(diǎn)算法與FLIM結(jié)合，也同樣對(duì)FLIM的發(fā)展起著至關(guān)重要的作用?？偟膩碚f，熒光壽命成像FLIM的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題，對(duì)生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)有著重要的意義。

在基于時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)的熒光壽命成像實(shí)驗(yàn)中，通過選用超快激光器可以優(yōu)化脈沖持續(xù)時(shí)間，單光子探測(cè)器和時(shí)間數(shù)字轉(zhuǎn)換器的時(shí)間抖動(dòng)則成為制約時(shí)間分辨率的關(guān)鍵參數(shù)。熒光壽命成像可進(jìn)行高質(zhì)量的多色成像實(shí)驗(yàn)或?qū)崿F(xiàn)STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應(yīng)用的熒光壽命測(cè)定技術(shù)。熒光壽命通常在ps～us量級(jí)，在如此短的時(shí)間量級(jí)上進(jìn)行測(cè)量，它是較為成熟準(zhǔn)確的測(cè)試手段。TCSPC的工作原理是使用一個(gè)同步信號(hào)源驅(qū)動(dòng)激光器，出射光脈沖照射樣品池，在利用光子探測(cè)裝置（多為PMT）對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行探測(cè)，每一個(gè)光子計(jì)數(shù)信號(hào)在FT1010中都會(huì)落入一個(gè)對(duì)應(yīng)的時(shí)間窗口，經(jīng)過一定時(shí)間的統(tǒng)計(jì)疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復(fù)以后，不同的時(shí)間通道累積下來的光子數(shù)目不同。測(cè)量熒光壽命需要極快響應(yīng)時(shí)間的探測(cè)器。

時(shí)域法熒光壽命的測(cè)量和熒光壽命成像主要有時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)法（time correlated single photon counting, TCSPC）、門控探測(cè)法（time-gated detection）、條紋相機(jī)測(cè)量法（streak-FLIM）、頻閃技術(shù)等四種常見的方法。TCSPC是目前測(cè)量熒光壽命的主要技術(shù)，同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光引起起始光電倍增管產(chǎn)生電信號(hào)，該信號(hào)通過恒分信號(hào)甄別器1啟動(dòng)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器（time-amplitude converter，TAC），時(shí)幅轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生一個(gè)隨時(shí)間線性增長(zhǎng)的電壓信號(hào)。此外，同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光通過激發(fā)單色器后到達(dá)樣品池，樣品產(chǎn)生的熒光信號(hào)再經(jīng)過發(fā)射單色器到達(dá)終止光電倍增管，由此產(chǎn)生的電信號(hào)經(jīng)由恒分信號(hào)甄別器2到達(dá)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器并使其停止工作。此時(shí)，時(shí)幅轉(zhuǎn)換器根據(jù)累積電壓輸出一個(gè)數(shù)字信號(hào)并在多通道分析儀（multi-channel analyzer）的相應(yīng)時(shí)間通道計(jì)入一個(gè)信號(hào)，表明檢測(cè)到壽命為該時(shí)間的一個(gè)光子。經(jīng)過幾十萬次的重復(fù)后，不同的時(shí)間通道累積下來的光子數(shù)目不相同。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題，對(duì)生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)有著重要的意義。湖北植物熒光壽命成像價(jià)格

時(shí)域和頻域技術(shù)在各種熒光顯微壽命成像平臺(tái)中都有應(yīng)用。江蘇顯微熒光壽命成像哪里買

熒光壽命成像分析：熒光壽命是用于幾種生物測(cè)定的穩(wěn)健參數(shù)。它有可能替代傳統(tǒng)的測(cè)量技術(shù)，如吸收法、冷光法或熒光強(qiáng)度法3。熒光團(tuán)物理化學(xué)環(huán)境的任何變化都會(huì)導(dǎo)致熒光壽命的改變?？赏ㄟ^各種機(jī)制來研發(fā)基于壽命的分析，例如簡(jiǎn)單的結(jié)合測(cè)定，涉及到兩個(gè)組分的結(jié)合（一個(gè)被熒光標(biāo)記）而引起FLT的變化。另一種機(jī)制是猝滅釋放型測(cè)定，涉及大量過量存在的猝滅物質(zhì)，其具有低而有限的熒光。一旦熒光化合物被釋放（通過酶促反應(yīng)或與互補(bǔ)DNA結(jié)合），系統(tǒng)的壽命就會(huì)改變。FLT可與FRET（熒光共振能量轉(zhuǎn)移）分析結(jié)合用于能量轉(zhuǎn)移效率測(cè)量。江蘇顯微熒光壽命成像哪里買

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