熒光壽命成像（FLIM）的方法特別適合于體內診斷，因為它們是無創(chuàng)且無損的。因此，它們被普遍用于受試者的臨床研究和醫(yī)學檢查。例如，該技術可以用于以下領域：皮膚的體內診斷：人類皮膚的多光子擴散層析成像結合了雙光子激發(fā)和非解掃檢測，因此，多光子FLIM可以提供組織層的光學切片圖像，深度可達100 μm。人皮膚細胞的體內雙光子成像是可能的，而不會損害組織的活力，可以從亞細胞分辨率重建三維結構。眼科檢查：眼科FLIM結合了快速光束掃描和皮秒二極管激光器激發(fā)的功能。該方法非常靈敏，可以記錄人眼眼底（背景）的壽命圖像。通過這種方式，有可能及早發(fā)現(xiàn)眼部疾病，因為這些疾病通常伴隨著眼底的代謝變化。反過來，這些引起內源性熒光團的熒光衰減參數(shù)的變化。市場上熒光壽命的測量方式可分為時域法和頻域法。廣東顯微熒光壽命成像價錢

熒光壽命成像FLIM在生物學上的應用根據(jù)熒光分子種類可以分為三種：分別為自發(fā)熒光FLIM、外源分子探針FLIM和FRET-FLIM。自發(fā)熒光FLIM被普遍應用于非標記生物成像領域。所謂自發(fā)熒光，即生物細胞本身便包含熒光分子，稱為內源性熒光分子團。FLIM通過對自發(fā)熒光分子團（如NAD(P)H和FAD）熒光壽命的考察，可以實現(xiàn)細胞代謝的監(jiān)測。這種方案無需人為對樣品加入熒光試劑便可以發(fā)射熒光，有效減少了熒光染料對樣品的毒性、熒光分子與樣品的非特異性結合及染料對生理性能的干擾影響。浙江開放式熒光壽命成像報價熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。

熒光壽命成像 (FLIM)通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。可顯示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅（即檢測到的光子數(shù)）。由于FRET減少了供體壽命，因此如果無FRET的供體壽命已知，就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此，F(xiàn)LIM-FRET為內部參照—這一特點減少了基于強度測量FRET時的很多缺點。由于其熒光壽命是染料的固有特性，因此對其他不利影響（如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達水平）具有普遍的不變性。使用基于強度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設。通常情況并非如此。供體分子這種變化的“非結合”組分給測量的FRET效率帶來了相當大的不確定性，使得無法在實驗之間進行比較。熒光壽命成像克服了這一缺點。

熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。時間域測量方法涉及用短光脈沖照射樣品（比色皿、細胞或組織），然后隨時間測量發(fā)射強度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測方法可用于壽命測量，其中時間相關單光子計數(shù)（TCSPC）可實現(xiàn)簡單的數(shù)據(jù)收集和增強的定量光子計數(shù)。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調制。在該方法中，發(fā)射發(fā)生在與入射光相同的頻率處，并且隨著激發(fā)光兼有相位延遲和振幅的變化（解調）。壽命測量不需要波長比率探針來提供眾多分析物的定量測定。壽命法通過使用光譜位移探針擴展了分析物濃度范圍的靈敏度。壽命測量可用于沒有直接探針的分析物。包括葡萄糖、抗原或基于熒光能量轉移轉導機制的任何親和力或免疫測定。熒光壽命成像具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點。

影響熒光壽命成像測量的因素有哪些？散射光的影響： 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法：先用短的激發(fā)光激發(fā)，檢出溶液的拉曼峰，然后進行熒光光譜校正。因為熒光光譜不隨激發(fā)光波長的改變而改變，而拉曼光卻隨之改變。高濃度樣品的影響：1）當激發(fā)光照射高濃度樣品時，在激發(fā)光入口附近產生熒光，但這些熒光并不能進入熒光檢測器。2）高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。3）熒光的再吸收：即熒光光譜的短波長端和激發(fā)光譜的長波長端如果相互重疊，則發(fā)生熒光再吸收。熒光壽命成像主要通過TCSPC技術實現(xiàn)。杭州分子熒光壽命成像哪家好

熒光壽命成像可以提供有關電信號變化、離子和氧含量、溫度、細胞或其環(huán)境中的 pH 值的定量信息。廣東顯微熒光壽命成像價錢

熒光壽命成像是什么？如果分子環(huán)境刺激激發(fā)態(tài)衰變而不發(fā)射光子，則熒光強度會降低（淬滅）。熒光淬滅是一條單獨的發(fā)射路徑，因此在動力學上與熒光過程形成競爭關系。激發(fā)態(tài)存儲現(xiàn)在可以通過一個以上的過程衰變，從而縮短熒光壽命。這種壽命的改變可用于收集分子環(huán)境的信息。一種特殊類型的淬滅是將激發(fā)能量以非輻射的方式傳遞到相鄰的不同熒光染料中：“熒光共振能量轉移”，F(xiàn)RET。此時，不只第1個熒光染料（供體）變暗，壽命變短，而且第二個熒光染料（受體）在“錯誤的”激發(fā)顏色下開始發(fā)光。由于這種效果的產生需要兩種熒光染料（小于10 nm）的密切接觸，因此將其用作研究分子相互作用的“分子標尺”。它也是許多現(xiàn)代FRET生物傳感器的基礎。廣東顯微熒光壽命成像價錢

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