熒光壽命取決于熒光分子所處的微環境,通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光分子受激發后發光,熒光壽命量化了發光的衰減率。該特征時間不但取決于特定的熒光團,還取決于其環境,分子相互作用影響弛豫過程并改變熒光團的壽命。熒光壽命是微環境的相對參數,不受環境吸收、樣本濃度等因素影響,因此能夠對生物組織環境中的 p H 值水平、離子濃度、氧分子濃度等微環境狀態進行高精度檢測。熒光壽命顯微成像(FLIM),可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導體領域具有重要的應用價值。熒光壽命成像可以定量的區分參與FRET和沒有參與FRET的分子數量。江蘇分子熒光壽命成像研發
熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合,熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發光強度和光漂白影響等優點。熒光壽命成像(FLIM)對細胞信號傳導及調控,蛋白間的相互作用等生物研究發揮著很大作用。利用熒光壽命成像顯微鏡技術可實現可以實時監控發光納米顆粒在活細胞內的穩定性。在過去的十年中,光學技術硬件和軟件、材料科學和生物醫學的迅速發展,共同促進了FLIM技術及其應用的巨大進步。化學熒光壽命成像哪家好熒光壽命顯微成像是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合。
熒光壽命通常來講是一定的,不受激發光強度、熒光團濃度等因素的影響,只與熒光團所處的微環境有關,因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對樣品進行熒光壽命成像,可以對樣品所在的微環境中的許多物理參數如氧壓、溶液疏水性等及生物化學參數如pH值、離子濃度等進行定量測量。此外,熒光壽命成像技術還可以同時獲得分子狀態和空間分布的信息。因此,熒光壽命成像在生物醫學領域有廣闊的應用前景。
熒光壽命成像和生物發光的不同之處:產生光子的原理不同,類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發光水母一樣,生物發光與熒光成像在本質上,都是機體中特定的細胞或材料發出光子,被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像,但是生物發光與熒光壽命成像產生光子的過程和機制是完全不同的。生物發光與熒光成像相同點:都需要對細胞進行標記。生物發光產生的光子和熒光壽命成像產生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像,就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發光水母一樣。熒光壽命(FLT)是熒光團在發射光子并返回基態之前花費在激發態的時間。根據熒光基團的不同,FLT可以從皮秒到數百納秒不等。熒光壽命成像技術是通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。
熒光壽命成像可以干什么?熒光壽命成像圖像中每一個像素點在phasor圖上都有一個對應的點。因此我們可以獲取每個像素點的壽命信息,也可以獲知每一壽命所對應的圖像區域。熒光壽命成像可以提供熒光強度(光子數)和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發(結合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術,無需解剖或專門制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實現深度解析測量。特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復合材料以及其相關的原理探究和設計優化。熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優點;上海熒光壽命成像使用方法
熒光壽命成像可用于多種生物應用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、皮膚成像等。江蘇分子熒光壽命成像研發
熒光壽命成像技術能夠實時監控納米顆粒在細胞內的穩定性。FLIM不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測生物生物樣品等優點,它在監控熒光納米材料的穩定性上還具有以下幾個優勢:(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細胞分化導致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響;(2)很多常見的發光材料的熒光壽命都遠遠大于細胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾;(3)發光材料的熒光壽命和其材料的穩定性密切相關,熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應材料的化學穩定性。基于上述原理,他們利用FLIM技術系統考察了半導體量子點和金納米簇在活的細胞(HeLa)里72小時內的穩定性,以及不同的表面配體對這一過程的影響。江蘇分子熒光壽命成像研發
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