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珠?;瘜W(xué)熒光壽命成像怎么樣

來源: 發(fā)布時間:2023-03-30

熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點,它在監(jiān)控?zé)晒饧{米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個優(yōu)勢:(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細胞分化導(dǎo)致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響;(2)很多常見的發(fā)光材料的熒光壽命都遠遠大于細胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾;(3)發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關(guān),熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應(yīng)材料的化學(xué)穩(wěn)定性。熒光壽命成像是一種重要的熒光顯微鏡技術(shù)。生物發(fā)光與熒光成像相同點是都需要對細胞進行標記。珠?;瘜W(xué)熒光壽命成像怎么樣

熒光壽命成像是熒光基團在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團激發(fā)態(tài)停時間不同,大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點對點的時間相關(guān)單光子計數(shù)(TCSPC),但由于過去檢測硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展,在顯微鏡視野內(nèi)進行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘柌杉臒晒鈮勖上癯蔀榭赡?。熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多?yōu)點:不受染料濃度的影響,無論染色或免疫熒光的效率高或低,熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù),這意味著更少的實驗數(shù)量和重復(fù)性更好的實驗結(jié)果。不受光漂白的影響,熒光發(fā)射時間不受激發(fā)光強度的影響,因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。珠海顯微熒光壽命成像制造熒光壽命成像的優(yōu)勢是什么?

熒光壽命的測量和熒光壽命成像主要有時間相關(guān)單光子計數(shù)法(time correlated single photon counting, TCSPC)、門控探測法(time-gated detection)、條紋相機測量法(streak-FLIM)、頻閃技術(shù)等四種常見的方法。TCSPC是目前測量熒光壽命的主要技術(shù),同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光引起起始光電倍增管產(chǎn)生電信號,該信號通過恒分信號甄別器1啟動時幅轉(zhuǎn)換器(time-amplitude converter,TAC),時幅轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生一個隨時間線性增長的電壓信號。此外,同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光通過激發(fā)單色器后到達樣品池,樣品產(chǎn)生的熒光信號再經(jīng)過發(fā)射單色器到達終止光電倍增管,由此產(chǎn)生的電信號經(jīng)由恒分信號甄別器2到達時幅轉(zhuǎn)換器并使其停止工作。

熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細胞等有效分離。熒光團在光譜上非常相似(max 580 vs 573)無法分離,但它們在熒光壽命上差異明顯。作為生物傳感器,如評價藥物/理化條件對細胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍,實現(xiàn)可相互驗證的多維度樣品成像。實現(xiàn)真正的生物動力學(xué)分析和功能成像。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。熒光壽命成像和生物發(fā)光的不同之處是什么?

為什么說熒光壽命成像技術(shù)是先進的?熒光壽命成像可以提供熒光強度(光子數(shù))和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發(fā)(結(jié)合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術(shù),無需解剖或?qū)iT制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實現(xiàn)深度解析測量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計優(yōu)化。熒光壽命成像的應(yīng)用領(lǐng)域有哪些?北京多色熒光壽命成像怎么操作

熒光壽命成像可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。珠?;瘜W(xué)熒光壽命成像怎么樣

為什么說熒光壽命成像FLIM相比于熒光強度成像更有優(yōu)勢?通過熒光強度成像可以獲得熒光分子的空間分布,較為直接和簡便,但是當熒光分子具有相似的頻譜特性,或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時,依賴強度進行成像的方案便無法準確反映信息。與基于光強的成像方式不同,熒光壽命成像FLIM適用于測量熒光分子環(huán)境的變化,或是測量分子的運動情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無關(guān),且不受影響光強的光散射或是光吸收影響,可以精確測量熒光淬滅過程,對生物分子微環(huán)境進行定量測量。熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。珠?;瘜W(xué)熒光壽命成像怎么樣

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