外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以普遍普及。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集菌類，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物。外泌體提?。壕垡叶迹≒EG）為常用的多聚物，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀。溫州正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家

外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，可通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體，內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間，其中包含RNA、蛋白質(zhì)、microRNA、DN 段等多種物質(zhì)，存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史，雖然較初被認(rèn)為可能是細(xì)胞的“垃圾”，所以才被排出來，但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進(jìn)行細(xì)胞間信息傳遞。如今，研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、一些病癥細(xì)胞發(fā)生的發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用。南京外泌體提取試劑價(jià)格外泌體的提取方法：色譜法。

外泌體在肺病進(jìn)程中的作用：在一些病癥微環(huán)境中，一些病癥細(xì)胞來源的外泌體能夠誘導(dǎo)CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，壓制機(jī)體的抗一些病癥免疫反應(yīng)；肺病細(xì)胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a，可在免疫細(xì)胞中結(jié)合并啟動(dòng)TLR8，使TLR介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路活化，從而導(dǎo)致一些病癥的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在肺病的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，細(xì)胞間通訊扮演著重要的角色。據(jù)有關(guān)報(bào)道稱，NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達(dá)與肺病的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。此外，啟動(dòng)的T細(xì)胞可以通過調(diào)控Fas信號(hào)通路增加基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)肺病的轉(zhuǎn)移。這些機(jī)制有望成為肺病治病的潛在靶點(diǎn)。雖然大多數(shù)外泌體都是促進(jìn)一些病癥的侵襲與轉(zhuǎn)移，但也有報(bào)道稱，外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與增殖。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物。

外泌體鑒定：外泌體分離之后，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物，多角度進(jìn)行鑒定。l透射電鏡鑒定法：簡(jiǎn)稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法：簡(jiǎn)稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度快，檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測(cè)：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；細(xì)胞質(zhì)蛋白，如肌動(dòng)蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）；使用可截留100KD分子量的膜，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后。用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng)：選擇血清還是血漿？推薦大多數(shù)研究選擇血漿。

外泌體在肺病治病中的作用：有研究發(fā)現(xiàn)，使用外泌體運(yùn)載紫杉醇（PTX）可顯著提高病細(xì)胞對(duì)PTX的吸收，將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細(xì)胞毒性，Exo-PTX能顯著壓制肺病的發(fā)展。Aqil等在進(jìn)行裸鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，加載至外泌體中的雷公藤紅素（Exo-CEL）比普通的CEL有更強(qiáng)的抗一些病癥功效，且在小鼠中未發(fā)現(xiàn)明顯全身性或系統(tǒng)性毒性，由此可以證明，外泌體制劑可以有效增強(qiáng)CEL功效并降低與劑量有關(guān)的毒性。到目前為止，外泌體在肺病治病方面的研究主要集中于免疫壓制，有效的外泌體藥物遞送平臺(tái)的搭建以及外泌體相關(guān)的潛在治病靶點(diǎn)的探索。已有的研究表明外泌體在肺病治病領(lǐng)域有著廣闊的前景，期待外泌體在肺病治病領(lǐng)域早日得到突破，造福更多的患者。正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商通過超速離心(120000g/分鐘)20小時(shí)以上才能獲得足夠的外泌體量。外泌體的提取分離：密度梯度離心。溫州正規(guī)外泌體提取試劑

外泌體提取：用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇（PEG）。溫州正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家

外泌體的提取方法，先用含無外泌體血清的培養(yǎng)基對(duì)人脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行饑餓培養(yǎng)，這樣可使干細(xì)胞處于正常生長(zhǎng)狀態(tài)，不會(huì)被克制生長(zhǎng)增殖，其所分泌的外泌體所包含的有效物質(zhì)也更貼近其自然狀態(tài)下的外泌體，然后將含有外泌體的培養(yǎng)上清液進(jìn)行低速差速離心(即先一離心處理、再第二離心處理)以去除細(xì)胞及其碎片，用100kd超濾管對(duì)低速差速離心后的離心液進(jìn)行超濾濃縮得到外泌體濃度更高的超濾液，將超濾液經(jīng)過第三離心處理去除雜質(zhì)后直接用0.22μm過濾器過濾除菌，過濾掉粒徑為220nm以上的物質(zhì)，進(jìn)一步得到含顆粒粒徑小于220nm的濃縮液，因超濾濃縮處理和第三離心處理使得液體量濃縮，這樣過濾除菌效率得到較大提高，較后將濃縮液進(jìn)行超速離心的第四離心處理分離提取到外泌體。該外泌體的提取方法，既結(jié)合了差速離心，又結(jié)合了超濾和超速離心，通過該提取流程，較終可高效地從人脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)培養(yǎng)上清液中提取到高濃度、高純度的外泌體，具有操作簡(jiǎn)單、成本低，適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的特點(diǎn)。溫州正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家