外泌體研究思路。外泌體研究通常與高通量測序的聯系緊密,研究思路可以分為三大類:表達譜、分子標志物和分子機制方向,其中表達譜思路的特點就是短平快、通常以測序數據為主要內容,短平快發表3-5分文章。而分子標志物的特點是在表達譜基礎之上加入大量樣本驗證,建立ROC、KM曲線,分析分子與臨床疾病的相關性為主,通常文章影響因子在3-10分之間。分子機制研究,顧名思義要做到細胞功能、機制研究深度,因此工作量通常較大,影響因子通常能夠上10+。唐山正規外泌體提取試劑產品介紹在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程,與多種疾病的發生和進程密切相關這些試劑盒不需要特殊設備,隨著產品不斷更新換代,提取效率和純化效果逐漸提高。深圳正規外泌體提取試劑生產廠家

作為一種分子通斷開關的KRAS發生突變時會處于“開啟”狀態。在80%~95%的胰腺導管腺病(PDAC)當中,這個基因發生突變,這也是這種一些疾病中較為常見的突變。這些研究人員證實iExosome能夠運送特異性地靶向KRAS的siRNA和shRNA分子,并且比他們的合成對應物脂質體(liposome)更加高效。脂質體不具有外泌體表現出的天然復雜性和優勢。德州大學MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學助理教授ValerieLeBleu博士說,“我們的研究提示著與脂質體相比,外泌體表現出運送siRNA分子和壓制侵襲性胰腺瘤生長的優異能力。我們也證實外泌體表面上的CD47存在允許它們躲避來自循環單核細胞的吞噬作用。深圳正規外泌體提取試劑生產廠家外泌體提取:超濾膜也可用于分離外泌體。

來源于不同的組織的外泌體不僅具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關鍵分子。有關外泌體分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制近些年剛剛開始受到關注,與外泌體相關的被pubmed收錄的文章數量和國自然基金項目中標數量逐年增長,表明國內外對外泌體的研究興趣日益增長。細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據它們的大小和發生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,內含有特定的蛋白質、脂質、細胞因子或遺傳物質。
研究探討了外泌體是否可以作為RNAi的有效載體的可能性。與脂質體和其他合成藥物納米顆粒載體不同,外泌體含有可能增強內吞作用的跨膜和膜錨定蛋白,從而促進其內容物的遞送。CD47是外泌體蛋白質之一,是一個普遍表達的整合素相關跨膜蛋白,其部分功能可以保護細胞免受吞噬作用。CD47是信號調節蛋白α(SIRPα,也稱為CD172a)的配體,CD47-SIRPα間的結合能夠發出“不要吃我”的信號,從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進胰腺病細胞增殖,增強胞飲作用從而促進一些病癥細胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細胞有一定毒性作用,但使用外泌體能夠較小化對細胞的毒性。研究人員發現,CD47和病基因KRAS驅動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環系統的清理,并增強胰腺病細胞對外泌體的特異性。所以,外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期。外泌體提取:聚乙二醇(PEG)為常用的多聚物,可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無創診斷。外泌體提取:高速離心沉淀外泌體。唐山外泌體提取試劑廠家供應
外泌體攜帶大量特異性的蛋白質以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質。深圳正規外泌體提取試劑生產廠家
外泌體的提取、分離方法:梯度密度離心法。研究發現,外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,因此,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結合,原理是先除去非囊泡物質,再通過梯度密度濃縮提取外泌體,該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足,污染物質可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個密度范圍又比較寬。深圳正規外泌體提取試劑生產廠家