瞬時轉染方法1.接種細胞：轉染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養基，替換成無血清培養基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養基。更多關于PolysciencesPEI相關內容歡迎咨詢上海曼博生物！MAXgene GMP是一種cGMP級PEI轉染試劑。上海PEI轉染試劑哪個品牌好

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題，歡迎咨詢上海曼博生物！上海PEI轉染試劑哪個品牌好PEI轉染試劑和其他轉染試劑相比有什么優勢呢？

特別提醒1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優化。更多關于Polysciences PEI相關內容歡迎咨詢上海曼博生物！

轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養基，替換成無血清培養基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養基。4.孵育細胞和分析結果：在CO2培養箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達。5.轉染24h后，將細胞傳代至新鮮的生長培養基中（將細胞稀釋10倍以上），在CO2培養箱中37℃孵育過一晚。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約1~2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。更多關于Polysciences PEI相關內容歡迎咨詢上海曼博生物！近期還可申請PEI轉染試劑試用裝！有誰用過Polysciences的PEI轉染試劑？

細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養皿上（根據實驗需要選擇培養皿，使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90％）。根據細胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養基。2.制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管，一管將質粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中，輕輕搖動平皿混勻，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育。注：每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致。3.培養6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養基，繼續培養，16h左右可以觀測到報告基因的表達。更多關于Polysciences PEI相關內容歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉染試劑和脂質體轉染試劑的區別？廣東GMPPEI轉染試劑

PEI轉染試劑可以轉染哪些細胞？上海PEI轉染試劑哪個品牌好

PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經費很有限，被逼無奈只能放棄脂質體2000，選擇PEI，以至于相當長的時間內，轉染試驗都不順利。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點：1. PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書，所用質粒盡量去內2. 轉染時，一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中，順序不可錯，輕微混勻，靜止20 min3. 轉染后4小時，一定要換液！換含有FBS的完全培養液！因為PEI對細胞毒性太大4. 如果后續試驗涉及到穩定篩選，建議把血清濃度適當提高。PS：事實證明，PEI是可行的，已經做出穩定細胞系了。更多關于Polysciences PEI相關內容歡迎咨詢上海曼博生物！上海PEI轉染試劑哪個品牌好