等電點沉淀法利用蛋白質在等電點（pI）時凈電荷為零、溶解度比較低的特性實現分離。不同蛋白質的等電點存在差異，通過調節溶液pH值至目標蛋白的pI，可使目標蛋白沉淀析出，而雜蛋白仍溶解于溶液中。該方法操作簡便、成本低，但分辨率較低，常與鹽析法聯合使用以提高粗提效果。例如，在酪蛋白提取中，將牛奶pH值調節至4.6（酪蛋白的pI），酪蛋白會迅速沉淀，再經離心收集即可完成粗提。使用該方法時需緩慢調節pH值，避免局部pH驟變導致蛋白變性。穩定的緩沖液體系對蛋白分離純化至關重要。蔡甸區膜蛋白分離純化基礎概念

蛋白分離純化的基本原則遵循“分步分級、逐步富集”，主要依據是蛋白質與雜質在物理化學性質上的差異。這些差異包括分子大小、溶解度、電荷性質、疏水性、生物親和力等，不同分離技術分別針對某一特定性質實現分離。例如，利用分子大小差異可采用凝膠過濾層析，利用電荷差異可采用離子交換層析。合理組合多種技術形成純化流程，能有效提高純化效率，減少目標蛋白活性損失，通常純化流程需經過粗提、中度純化、精細純化三個階段。。云南重組蛋白分離純化基礎概念蛋白分離純化技術對蛋白質藥物的開發具有重要意義。

非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳在不使用SDS和還原劑的情況下進行，蛋白質的遷移速率取決于其自身電荷、大小和形狀。它能保留蛋白質的天然結構和生物活性。結合活性染色，例如在凝膠中直接檢測酶促反應，可以在電泳后直接鑒定具有活性的目標蛋白條帶，是分析蛋白質天然狀態和活性的有效工具。獲得高純度、高均一性且穩定的蛋白質樣品是進行X射線晶體學研究的先決條件。蛋白質結晶是一個探索性的過程，通過機器人技術，在96孔板中同時嘗試成千上萬種不同的沉淀劑、pH和添加劑條件，尋找能形成高質量單晶的比較好環境。純化質量直接決定了結晶實驗的成功率。

動態光散射是一種快速、無損的技術，用于測量溶液中蛋白質或納米顆粒的流體力學半徑分布。在蛋白質純化中，DLS主要用于：1）評估樣品的單分散性，一個狹窄的峰表明樣品均一，是結晶和結構研究的理想狀態；一個寬峰或多個峰則表明存在聚合體或降解產物；2）監測蛋白質的穩定性，通過在不同條件下（溫度、時間）測量粒徑變化，可以快速評估蛋白質是否發生聚集；3）優化緩沖液條件，篩選出能維持蛋白質單分散性的配方。DLS是SEC和SDS-PAGE的重要補充，提供溶液狀態下的原始信息。蛋白分離純化的目的是獲得高質量的功能性蛋白。

鹽析法是蛋白粗提的經典技術，基于“鹽溶與鹽析”原理實現蛋白分離。蛋白質在低鹽濃度溶液中溶解度隨鹽濃度升高而增加（鹽溶），當鹽濃度達到一定閾值后，溶解度反而下降并析出（鹽析）。常用鹽類為硫酸銨，因其溶解度大、溫度系數小、對蛋白活性影響小且價格低廉。通過調節硫酸銨飽和度，可使不同蛋白依次析出，例如高飽和度硫酸銨可沉淀大分子球蛋白，低飽和度則沉淀小分子白蛋白。鹽析后需通過透析或脫鹽柱去除鹽分，避免影響后續純化步驟。蛋白分離純化技術的發展推動了生命科學的進步。蔡甸區膜蛋白分離純化基礎概念

蛋白分離純化的原理基于物理、化學及生物特性差異。蔡甸區膜蛋白分離純化基礎概念

尺寸排阻層析，也稱為凝膠過濾，是根據蛋白質流體力學體積（或表觀分子量）進行分離的獨特方法。其固定相是由高度多孔的惰性顆粒組成。當蛋白質混合物通過層析柱時，大于孔徑的蛋白質無法進入顆粒內部，只能從顆粒間的空隙流過，因而較早被洗脫。較小的蛋白質可以進入部分或全部孔徑，在柱內停留的路徑更長，因而被較晚洗脫。SEC的流動相只用于輸送蛋白質，不參與分離過程，因此通常采用等ocratic洗脫（恒定緩沖液成分）。SEC主要用于三個目的：1）脫鹽或更換緩沖液；2）估算蛋白質的表觀分子量；3）作為精純步驟，分離蛋白質的單體與聚合體，或分析蛋白質的寡聚狀態。其優點是條件溫和，能保持蛋白質活性，但分辨率相對較低，且上樣量小。蔡甸區膜蛋白分離純化基礎概念

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