小鼠給藥實操指南:尾靜脈、腹腔注射、灌胃技巧全解鎖
在動物實驗中,給藥的方式的選擇與操作規范直接影響實驗結果的準確性和動物福利。尾靜脈注射、腹腔注射、灌胃是小鼠實驗中常用的三種給藥的方式,新手常因操作不當導致給藥失敗、動物損傷甚至實驗數據偏差。下面就為大家帶來超詳細的實操技巧+避坑指南,新手也能快速上手!
一、尾靜脈注射:可精確直達血液循環的“高階操作”
尾靜脈注射能使藥物直接進入血液循環,起效快、生物利用度高,常用于快速給藥、免疫細胞回輸等場景。但因其操作精度要求高,是很多新手的“攔路虎”。
1. 主要操作技巧
小鼠固定是關鍵:選用小鼠固定器,將小鼠頭部朝前放入,調整固定器松緊度,使尾部完全暴露且小鼠無法轉身,讓尾部自然下垂。若沒有固定器,可用50ml離心管或者20ml注射器代替。固定時避免過緊導致小鼠窒息,過松則易掙扎。
尾部血管預處理:小鼠尾靜脈有3條(背側1條、腹側2條),優先選擇背側靜脈(較粗且易定位)。用75%酒精棉球反復擦拭尾部,利用酒精的溫熱效應擴張血管,同時去除尾部油脂便于進針。若血管不明顯,可將尾部浸入37℃溫水中1-2分鐘,或用手指輕輕揉搓尾部促進血流。
進針姿勢與角度:選用26-30G針頭(根據小鼠年齡調整,幼鼠用30G),吸取藥液后排空針管內氣泡。持針姿勢如握筆,針頭斜面朝上,與尾部呈15-30°角,在尾部中1/3段進針(尾部前端血管較細,后端靠近肛門易污染)。進針時動作要輕,當感覺到“落空感”且推注藥液無阻力、尾部無腫脹時,說明針頭已進入血管。
推注與拔針:推注藥液速度要緩慢均勻(根據藥物性質調整,刺激性的藥物更慢),同時觀察小鼠狀態。推注完畢后,用干棉球按壓進針點3-5秒止血,避免藥液外滲或出血。
2. 避坑注意事項
避免在尾部末端1/3段進針,此處血管細小易破裂;也不要反復在同一部位穿刺,以免形成血腫堵塞血管。
若推注時感覺阻力大、尾部出現發白或腫脹,立即停止推注并拔針,更換穿刺部位。
藥液濃度不宜過高,避免結晶堵塞針頭;油劑藥物需加熱至37℃左右再注射,防止刺激血管。
免疫缺陷小鼠(如NXG小鼠)尾部皮膚較薄,穿刺時力度要更輕,避免穿透血管壁。
二、腹腔注射:操作便捷的“常用選擇”
腹腔注射通過腹膜吸收藥物,操作相對簡單,適用于多種藥物給藥,尤其適合對血管刺激性大或不易靜脈注射的藥物。但操作不當易損傷內臟,需格外注意。
1. 主要操作技巧
小鼠固定方式:注射時用左手拇指和食指捏住兩耳及頭皮,無名指和小指捏住尾巴,腹部朝上,把小鼠控制在手掌間。
進針部位定位:選擇腹部左下腹或右下腹(避開正中線,此處有肝臟、膀胱等)。進針前用75%酒精棉球消毒皮膚。將針頭由下腹部腹中線兩側朝頭方向刺入腹腔。
推注與拔針:注射完畢拔針后停頓三秒,觀察液體是否溢出,如若溢出,需從另一側刺入重新注射。
2. 避坑注意事項
禁止在腹部正中線進針,避免損傷肝臟、脾臟或膀胱(膀胱充盈時更易受損,注射前可輕壓小鼠腹部促使排尿)。
進針深度不宜過深,尤其是幼鼠或消瘦小鼠,以免穿透腹膜損傷腸道。
油性的藥物或混懸液需充分搖勻后注射,避免藥物沉淀導致劑量不準確。
注射后觀察小鼠狀態,若出現精神萎靡、腹部腫脹或腹瀉,可能是藥液外滲或內臟損傷,需及時處理。
三、灌胃:經消化道給藥的“精確方式”
灌胃(胃內注射)能使藥物直接進入胃腸道吸收,避免藥物被口腔黏膜破壞,適用于需要經消化道給藥或無法口服的小鼠。操作時需避免損傷食道和氣管。
1. 主要操作技巧
工具準備:選用小鼠灌胃針(由針頭和塑料導管組成,導管末端圓潤,避免損傷食道),根據小鼠體重選擇合適規格(10g以下小鼠用12G,10-20g用10G,20g以上用8G)。
小鼠固定技巧:左手拇指和食指捏住小鼠頸部皮膚,將小鼠身體向上提起,使頭部與軀干呈一條直線(避免食道彎曲),保持小鼠穩定。
插針姿勢與深度:將灌胃針連接注射器,吸取藥液后排空氣泡。用右手持灌胃針,從小鼠口腔右側插入(避開牙齒),沿上顎緩慢插入食道。插入深度根據小鼠體重判斷:10g小鼠約2cm,20g小鼠約3cm,30g小鼠約4cm。插入時若感覺阻力大,不要強行插入,需調整角度后再試。
推注與拔針:確認灌胃針未插入氣管(可觀察小鼠呼吸,若呼吸平穩無咳嗽,說明位置正確)后,緩慢推注藥液。推注完畢后,輕輕旋轉灌胃針后拔出,避免藥液殘留于食道。
2. 避坑注意事項
關鍵的禁忌:避免將灌胃針插入氣管!若插入氣管,推注藥液會導致小鼠窒息死亡。判斷方法:插入后觀察小鼠呼吸,若出現劇烈咳嗽、呼吸困難,立即拔針。
灌胃針插入角度不宜過陡,避免損傷食道黏膜;也不要插入過深,以免損傷胃壁。
藥液量不宜過多,成年小鼠單次灌胃量不超過1ml,幼鼠不超過0.2ml,避免引起嘔吐或胃擴張。
具有強刺激性的藥物不宜灌胃,以免損傷胃腸道黏膜;若藥物為粉末,需充分溶解并過濾,避免顆粒堵塞灌胃針。
四、通用注意事項:實驗成功+動物福利雙保障
操作前準備:所有器械(針頭、灌胃針、注射器)需高壓滅菌;藥物需按要求配制,明確劑量和濃度;提前熟悉小鼠狀態,避開懷孕、患病或應激狀態的小鼠。
劑量精確控制:根據小鼠體重計算給藥劑量,使用微量注射器或移液槍確保劑量準確,避免因劑量誤差影響實驗結果。
動物福利保障:操作時動作輕柔,避免粗暴對待小鼠;固定時松緊適度,防止窒息或損傷;若需多次給藥,應間隔適當時間,減少動物應激。
操作后觀察:給藥后觀察小鼠精神狀態、飲食、飲水及排泄情況,若出現異常反應(如抽搐、腹瀉、體重驟降),及時記錄并處理。
小提醒:新手建議先在模擬模型或處死的小鼠上練習,熟練掌握操作技巧后再進行實驗。規范操作不僅能提高實驗成功率,更是對實驗動物的尊重與負責哦!