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小鼠aNSCs與腦類***的CERO培養進展優勢
基于CERO生物反應器建立小鼠aNSC培養體系***將CERO 生物反應器應用于小鼠 aNSCs 培養、腦類***開發及腦*組裝體構建，通過與傳統 6 孔懸浮培養板、96 孔 ULA 板對比，在可擴展性（單管容量達 5000 萬細胞、支持 200 + 類***培養）、生長動力學（細胞傳代頻率降低 2-4 倍、類***尺寸均勻）、長期培養穩定性（培養時長超 5 個月，較傳統方法延長 1.6 倍）三大維度展現***優勢，還成功構建出相互連接表面積超 50% 的腦聚集體模型，人工操作減少 50%，為相關研究提供更可靠的 3D 培養體系。
一、項目概述
項目定位：***將CERO 生物反應器應用于小鼠成年神經干細胞（aNSCs）培養、腦類***開發及腦*組裝體構建，填補其在小鼠 aNSCs 培養中的應用空白。**背景：傳統 3D 培養方法缺乏高級研究所需的可重復性，而可重復的 3R（替代、減少、優化）3D 培養系統需求日益迫切，項目與 OLS 合作驗證 CERO 的應用價值。
二、**優勢對比（CERO vs 傳統培養方法）
三、腦聚集體培養的關鍵突破
l 傳統局限：腦類***與*細胞球體的共培養模型（腦聚集體）中，兩者接觸面積極低（<10%），無法模擬腦*被健康腦組織包圍的臨床實際環境。
l CERO 解決方案：成功構建相互連接表面積超過 50% 的聚集體模型，精細模擬**侵襲過程（H&E 染色顯示腦類***向**組織外側生長超半數）。
l 性能提升：Ki-67 染色顯示膠質瘤及類***組織均有增殖活性，Cas-3 染色表明細胞凋亡減少，存活率顯著提高，模型更穩定持久。
四、操作流程概要
1. 預培養：將先前分化的腦類***與 GL261 膠質瘤球體（10,000 個細胞 / 孔）接種于 96 孔 ULA 板，預培養 3 天。
2. 共培養：轉移至新 96 孔 ULA 板，72 小時內形成細胞間緊密連接。
3. 分組培養：72 小時后，半數聚集體轉移至 CERO 管，另一半保留在 96 孔 ULA 板，繼續培養 48 小時（累計 120 小時）。分析：對組裝體進行固定、切片，采用 H&E、Ki-67（增殖標記物）、Cas-3（凋亡標記物）染色分析。
五、項目價值
CERO 生物反應器***提升了類***和腦聚集體的培養效率與質量，減少人工操作，為腦*等相關疾病的體內研究提供了更貼近臨床實際的替代模型，開辟了新的研究途徑。
關鍵問題
問題 1：CERO 生物反應器在長期培養穩定性方面，較傳統 6 孔懸浮培養板有哪些**提升？
答案：傳統 6 孔懸浮培養板*能穩定培養 3 個月，之后類***存活率下降、出現凋亡**；CERO 可實現超 5 個月的穩定培養（延長 1.6 倍），類***保持活性、**持續增殖，形態圓潤均勻，無需更新培養基，大幅提升長期研究的可行性。
問題 2：該項目在腦聚集體培養中，解決了傳統模型的什么**痛點？實現了怎樣的關鍵突破？
答案：傳統腦聚集體模型的**痛點是腦類***與*細胞球體接觸面積極低（<10%），無法模擬腦*被健康腦組織包圍的臨床微環境；CERO 的關鍵突破是構建出相互連接表面積超過 50% 的聚集體模型，精細再現** - 組織相互作用，且細胞凋亡減少、增殖活性提升，模型穩定性更強。
問題 3：CERO 生物反應器在可擴展性和人工操作方面，較傳統培養方法的具體優勢數據是什么？
答案：可擴展性上，CERO 單管培養容量達5000 萬細胞，支持200 + 類***培養，較 6 孔板（每孔 10-30 個類***）容量提升 20 倍，單位面積支持的類***數量提升 15 倍；人工操作上，較孔板培養減少50% 的培養基更換次數及操作時間，***提升培養效率。
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