均相發(fā)光技術(shù)也普遍用于細(xì)胞水平的分析，如細(xì)胞活力、凋亡和化合物毒性篩選。例如，基于ATP含量的細(xì)胞活力檢測：活細(xì)胞含有豐富的ATP，細(xì)胞裂解后釋放的ATP可與熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，發(fā)光強度與活細(xì)胞數(shù)量成正比。整個過程在同一個孔中加入裂解/檢測試劑即可完成，是均相操作的典范。對于細(xì)胞凋亡，可通過檢測caspase酶活性（使用熒光底物或發(fā)光底物）來實現(xiàn)均相分析。細(xì)胞毒性檢測則可測量因細(xì)胞膜損傷而釋放的胞內(nèi)酶（如乳酸脫氫酶LDH）活性，通過偶聯(lián)的發(fā)光反應(yīng)來定量。這些方法實現(xiàn)了對細(xì)胞狀態(tài)的快速、高通量、自動化評估。均相化學(xué)發(fā)光新突破！凍干試劑來了，靈敏度更高，結(jié)果更準(zhǔn)確！黑龍江技術(shù)升級均相發(fā)光

離子通道和轉(zhuǎn)運體是重要的藥物靶點，但傳統(tǒng)電生理方法通量極低。基于化學(xué)發(fā)光的離子敏炎癥料或蛋白，為高通量篩選提供了可能。例如，使用對鈣離子敏感的水母發(fā)光蛋白（Aequorin）或基于熒光素酶的鈣指示劑（如Photina）。當(dāng)離子通道開放引起離子內(nèi)流時，會觸發(fā)這些蛋白的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。將穩(wěn)定表達(dá)該報告系統(tǒng)和目標(biāo)離子通道的細(xì)胞系用于篩選，加入化合物后直接測量發(fā)光信號變化，即可高通量地發(fā)現(xiàn)通道的激動劑或阻斷劑。類似原理也可用于鈉、鉀等離子通道或某些轉(zhuǎn)運體的功能研究。黑龍江技術(shù)升級均相發(fā)光均相化學(xué)發(fā)光在傳染病診斷中的應(yīng)用效果如何？

均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)因其超高的通量、靈敏度和易于自動化的特性，已成為現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)高通量篩選（HTS）的支柱技術(shù)。在靶點導(dǎo)向的篩選中，它廣泛應(yīng)用于：激酶/磷酸酶抑制劑篩選（通過檢測磷酸化底物的量）、GPCR功能分析（檢測cAMP、IP3或β-arrestin招募）、核受體轉(zhuǎn)錄活性篩選（報告基因檢測）、蛋白-蛋白相互作用抑制劑篩選（如使用Alpha技術(shù)）、以及酶活性分析（蛋白酶、去乙酰化酶等）。其“混合-讀數(shù)”的模式允許在1536孔甚至更高密度板中進(jìn)行超大規(guī)模化合物庫（數(shù)十萬至上百萬）的篩選，每天可產(chǎn)生海量數(shù)據(jù)，極大加速了先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)進(jìn)程。

激酶是重要的藥物靶點，其活性檢測是藥物篩選的關(guān)鍵。均相發(fā)光技術(shù)，尤其是TR-FRET和Alpha技術(shù)，為此提供了理想平臺。以TR-FRET為例：將待測激酶、底物肽、ATP與待篩選化合物共同孵育。體系中包含兩種抗體，一種針對磷酸化底物（帶供體標(biāo)記），另一種針對底物肽的標(biāo)簽（帶受體標(biāo)記）。只有當(dāng)激酶活性正常，底物被磷酸化后，兩個抗體才能同時結(jié)合到底物肽上，使供受體靠近產(chǎn)生FRET信號。若化合物能抑制激酶，則磷酸化水平下降，F(xiàn)RET信號減弱。這種方法無需分離，可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中實時或終點法檢測，通量極高，是發(fā)現(xiàn)激酶抑制劑的主流手段。均相化學(xué)發(fā)光在 POCT（即時檢驗）領(lǐng)域的應(yīng)用現(xiàn)狀？

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）是均相發(fā)光技術(shù)中應(yīng)用比較多方面的信號產(chǎn)生機(jī)制之一。其原理是：當(dāng)一個熒光基團(tuán)（供體，Donor）的發(fā)射光譜與另一個熒光基團(tuán)或淬滅基團(tuán)（受體，Acceptor）的吸收光譜有足夠重疊，且兩者距離非常接近（通常1-10納米）時，供體的激發(fā)態(tài)能量會以非輻射方式轉(zhuǎn)移給受體。在均相檢測中，常將供體和受體分別標(biāo)記在相互作用的生物分子對（如一對抗體、或酶與底物肽）上。當(dāng)目標(biāo)分子存在并促使這對生物分子結(jié)合時，供體與受體被拉近，發(fā)生有效的FRET，導(dǎo)致供體熒光淬滅，受體熒光增強（如果受體是熒光團(tuán)）。通過監(jiān)測供體與受體熒光強度的比率變化，即可高靈敏度、高特異性地定量目標(biāo)分析物。均相化學(xué)發(fā)光在心血管疾病診斷中的應(yīng)用價值是什么？黑龍江技術(shù)升級均相發(fā)光

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GPCR是比較大的藥物靶點家族，其功能研究涉及配體結(jié)合、第二信使產(chǎn)生、下游信號通路活化等多個層面。均相發(fā)光技術(shù)多方面滲透于此領(lǐng)域。對于配體結(jié)合競爭實驗，可采用TR-FRET，將受體標(biāo)記供體，配體標(biāo)記受體。對于GPCR活化后比較關(guān)鍵的cAMP積累或IP3/DAG產(chǎn)生，均有成熟的均相檢測試劑盒。例如，cAMP檢測常采用基于抗體競爭原理的均相發(fā)光免疫分析。細(xì)胞裂解后，內(nèi)源性cAMP與加入的標(biāo)記cAMP競爭結(jié)合有限量的抗cAMP抗體。抗體結(jié)合事件通過FRET或Alpha技術(shù)被檢測，信號強度與內(nèi)源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細(xì)胞裂解液中進(jìn)行，快速、靈敏，完美契合GPCR激動劑/拮抗劑的高通量篩選。黑龍江技術(shù)升級均相發(fā)光