FAM并不是一種特定的熒光定量PCR儀品牌或型號，而是一種在熒光定量PCR中常用的熒光染料。FAM（Fluoresceinamidite）即羧基熒光素，具有高量子產(chǎn)率，在被特定波長的光激發(fā)后會發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光，其激發(fā)波長通常在495nm左右，發(fā)射波長在520nm左右。由于其熒光特性穩(wěn)定且靈敏，被廣泛應(yīng)用于熒光定量PCR實驗中，作為報告分子來對目標(biāo)DNA或RNA進(jìn)行定量檢測。很多熒光定量PCR儀都可以使用FAM染料進(jìn)行檢測，例如賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABIStepOnePlus等。這些儀器通常配備有能激發(fā)FAM染料發(fā)光的光源以及能檢測其發(fā)射熒光的光學(xué)系統(tǒng)。以QuantStudio?1Plus實時熒光定量PCR儀為例，它配備4種常用的激發(fā)和發(fā)射濾光片，包括FAM、VIC、ROX和Cy5，其激發(fā)光源為白光LED，激發(fā)范圍為455至530nm，可滿足FAM染料的激發(fā)需求。通過婚前或孕前篩查，能夠評估夫妻雙方生育患病子女的風(fēng)險，為遺傳咨詢和生育指導(dǎo)提供重要信息。南通熒光熒光定量PCR儀價格

熒光標(biāo)記探針法原理：使用一種特異性的熒光標(biāo)記探針，它能與目標(biāo) DNA 序列雜交。探針的 5' 端標(biāo)記有熒光報告基團(tuán)，3' 端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)。在游離狀態(tài)下，報告基團(tuán)發(fā)出的熒光會被淬滅基團(tuán)吸收，無法檢測到熒光信號。當(dāng) PCR 反應(yīng)進(jìn)行時，DNA 聚合酶在延伸引物的過程中，會將探針?biāo)猓箞蟾婊鶊F(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，報告基團(tuán)發(fā)出的熒光信號就可以被儀器檢測到。每擴(kuò)增一條 DNA 鏈，就會有一個探針被水解，釋放出一個熒光信號，熒光信號的強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量成正比。過程：在 PCR 反應(yīng)的退火階段，熒光標(biāo)記探針會與目標(biāo) DNA 序列特異性結(jié)合。在延伸階段，DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性會將探針從 5' 端開始逐個水解，使報告基團(tuán)游離出來，產(chǎn)生熒光信號。儀器會在每個循環(huán)的延伸階段檢測熒光信號的強(qiáng)度，隨著 PCR 反應(yīng)的進(jìn)行，熒光信號逐漸增強(qiáng)，同樣可以得到 Ct 值。定量依據(jù)：與熒光染料法類似，通過標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)待測樣本的 Ct 值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出起始模板量。由于熒光標(biāo)記探針具有特異性，能與特定的目標(biāo)序列雜交，因此可以更準(zhǔn)確地對目標(biāo)基因進(jìn)行定量分析，減少非特異性擴(kuò)增的干擾。揚(yáng)州熒光定量PCR儀型號結(jié)核分枝桿菌的檢測，傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法需要數(shù)周時間；

ROX通常并不指代一種特定的熒光定量PCR儀，而是一種熒光染料，在熒光定量PCR中常被用作被動參考染料。其作用是用于校正熒光信號，減少孔與孔之間由于加樣誤差、反應(yīng)體積差異、光學(xué)系統(tǒng)的微小變化以及蒸發(fā)等因素導(dǎo)致的熒光信號波動，提高實驗的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。在實時熒光定量PCR儀的使用中，很多儀器都可以兼容ROX染料進(jìn)行信號校正。例如，賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABI的7500、7900等型號的熒光定量PCR儀都支持ROX染料。不同的熒光定量PCR儀在檢測通道、光學(xué)系統(tǒng)、熱循環(huán)性能等方面存在差異，但只要其具備相應(yīng)的熒光檢測通道，能夠檢測ROX染料的熒光信號，并在軟件中支持以ROX信號作為參考進(jìn)行數(shù)據(jù)校正，就可以在實驗中使用ROX染料來輔助提高定量分析的準(zhǔn)確性。例如，QuantStudio1實時熒光定量PCR儀采用新型Optiflex光學(xué)檢測架構(gòu)，提供FAM、VIC和ROX三種常用激發(fā)和發(fā)射濾光片，實現(xiàn)3重實時定量分析。

以下是一些判斷熒光定量 PCR 儀光路系統(tǒng)是否需要校準(zhǔn)的方法：熔解曲線異常峰形改變：熔解曲線的峰形變得不規(guī)則、寬化或出現(xiàn)多個峰，而樣品和實驗條件均無變化時，可能是光路系統(tǒng)對熒光信號的檢測精度下降，導(dǎo)致熔解曲線的分析結(jié)果不準(zhǔn)確，此時需要考慮對光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)。Tm 值偏移：熔解曲線的 Tm 值（解鏈溫度）與預(yù)期值相比出現(xiàn)明顯偏移，且排除了引物設(shè)計、反應(yīng)條件等因素的影響，可能是光路系統(tǒng)的熒光檢測存在誤差，影響了對 DNA 雙鏈解鏈過程的準(zhǔn)確監(jiān)測，需要對光路進(jìn)行檢查和校準(zhǔn)。激發(fā)光源能夠穩(wěn)定且有效地激發(fā) TET 熒光染料，使其發(fā)出足夠強(qiáng)的熒光信號。

選擇適合自己的熒光定量 PCR 儀，需要綜合考慮多個因素，實驗類型：如果是進(jìn)行常規(guī)的基因表達(dá)分析、病原體定量檢測，普通的單通道或多通道熒光定量 PCR 儀即可滿足需求。例如，賽默飛世爾的 QuantStudio 3，適用于基礎(chǔ)的基因表達(dá)和病原體檢測實驗。若是涉及到復(fù)雜的多重 PCR 實驗、SNP 基因分型，則需要選擇具有更多熒光通道、更高分辨率的儀器，如羅氏的 LightCycler 480，可同時檢測多個熒光信號，適用于多重分析。通量要求：根據(jù)實驗樣本數(shù)量來選擇。對于樣本量較少的實驗，如小型實驗室的科研項目或臨床診斷的少量樣本檢測，96 孔板的熒光定量 PCR 儀就足夠，如伯樂的 CFX96。而對于高通量的檢測需求，如大規(guī)模的基因篩查、藥物研發(fā)中的大量樣本篩選，可能需要選擇 384 孔板的儀器，如 ABI 7900HT，能提高實驗效率，減少實驗成本。如 FAM、ROX 等常用染料的通道，以實現(xiàn)多重 PCR 檢測，同時對多個目標(biāo)基因進(jìn)行定量分析。南通Cy5熒光定量PCR儀一般多少錢

準(zhǔn)確的熱循環(huán)系統(tǒng)對于保證 PCR 反應(yīng)的特異性和效率至關(guān)重要，進(jìn)而影響檢測靈敏度。南通熒光熒光定量PCR儀價格

熒光定量 PCR 儀是一種通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實時監(jiān)測反應(yīng)過程的儀器。工作原理：在 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個 PCR 進(jìn)程。隨著 PCR 擴(kuò)增的進(jìn)行，每經(jīng)過一個循環(huán)，熒光信號就會相應(yīng)增加。通過檢測熒光信號的變化，就可以判斷 DNA 的擴(kuò)增情況，進(jìn)而實現(xiàn)對初始模板的定量分析。常用的熒光化學(xué)物質(zhì)有 TaqMan 熒光探針和 SYBR 熒光染料等。TaqMan 探針法中，探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR 擴(kuò)增時，Taq 酶的 5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號。SYBR Green Ⅰ 法中，SYBR 熒光染料特異性地?fù)饺?DNA 雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加完全同步。南通熒光熒光定量PCR儀價格